background image
bilinmesi, yeni izole edilen genifl bir amino asit di-
zisinin tesbiti, genetik hastal>klardaki özel mutas-
yonlar>n saptanmas> ve moleküler tan> ifllem-
lerinde kullan>lan ya ASO problar>n>n ya da PCR
primerlerinin tasarlanmas> için elzemdir. Otoma-
tize olmufl dizi analizi, insan genomundaki (Bkz.,
Bölüm 8) 3 milyar baz>n tümünün nükleotid s>ra-
lamas> için E.coli, maya, S.cerevisiae, kurtçuk, Caenorbabdi-
tis elegans, meyve sine¤i, Drosophila melanoges-
ter, fare ve birçok patojenik mikroorganizmalar gi-
bi bilimsel ve medikal önemi olan di¤er organiz-
malar>n dizilerinin tamamlanmas>nda da yo¤un
olarak uygulanm>flt>r.
PROTE
Hem normal hem de anormal gen fonksiyonlar>n>n
analizi, ilgilenilen bir normal ve mutant genden
kodlanan proteinin araflt>r>lmas>na dayanmakta-
d>r. Bir çok durumda, yanl>zca DNA'daki molekü-
ler defekt bilinmek istenmez, bunun yan>nda de-
fektin klinik fenotipi oluflturmas> için kodlanan
proteinin nas>l de¤iflti¤inin de bilinmesi istenir.
Western Blot
DNA ve RNA için Southern ve Northern blot'un
gelifltirilmesinden k>sa bir süre sonra, özel prote-
inlerin saptanaca¤> bir ifllem tan>mlanm>fl ve bu
ifllem, W
We
esstte
errn
n b
bllo
ott olarak adland>r>lm>flt>r. Bu
teknik, genetik hastal>¤> bulunan hastalardan al>-
nan hücre ekstraktlar>ndaki mutant proteinin bo-
yutlar> ve miktar> hakk>nda bilgiyi elde etmek için
kullan>l>r. Bu metotta, hücre ekstraktlar>ndan izo-
le edilen proteinler, polikrilamid jel elektroforezi
kullan>larak boyutlar>na göre ayr>fl>r ve daha son-
ra bir membrana transfer edilir. Bu ayr>flm>fl pro-
teinleri tafl>yan membran, daha sonra analiz edil-
mek üzere proteini özgül olarak tan>yan antikorlar
ile inkübe edilir. Bu, antikor ve antijeni aras>nda-
ki özel etkileflmeden sonra birincisine karfl> olan
ikinci bir antikor kullan>larak histokimyasal, flo-
resan veya radyoaktif maddelerle tesbit edilebilir.
X geçiflli müsküler distrofili hastalarda, distrofin
kas proteinin boyutunu, bulunup bulunmad>¤>n>
saptamak için kullan>lm>fl bir Western blot örne¤i
fiekil 4-14'te gösterilmifltir.
Genel Kaynaklar
Davies K (1995) Human Genetic Disease Analysis:
A Practical Approach, 2nd ed. IRL Press, Ox-
ford, England.
Dieffenbach C, Dveksler G (1995) PCR Primer: A
Laboratory Manual. Cold Spring Harbor Labo-
ratory, Cold Spring Harbor, New York.
Fritsch EF, Wozney JM (1994) Methods of molecu-
lar genetics. In Stamatoyannopoulos G, Nien-
huis AW, Majerus PW, Varmus H (eds) The
Molecular Basis of Blood Diseases, 2nd ed.
W.B. Saunders, Philadelphia.
Sambrook J, Russell D (2001) Molecular Cloning: a
Laboratory Manual, 3rd ed. Cold Spring Har-
bor Laboratory, Cold Spring Harbor, New York.
Belirli Konular <çin Özel Kaynaklar
Handyside AH (1998) Clinical evaluation of preimplan-
tation genetic diagnosis. Prenat Diagn 18:1345,1348.
Monaco AP, Larin Z (1994) YACs, BACs, PACs and
MACs: Artificial chromosomes as research tools.
Trends Biotechnol 12:280-286
Vnencak,Wones CL (1999) Molecular testing for inheri-
ted diseases. am J Clin Pathol 112 (suppl 1:) S19,S32
Am J Clin Pathol 112 (suppl 1:) S19-S32.
Weedn VW (1996) Forensic DNA tests. Clin Lab Med
16:187-196.
Sorular
1. Afla¤>daki tan> yöntemlerini de¤erlendiriniz. Han-
gi laboratuvar metodu veya metotlar> en uygun
olabilir?
a. Duchenne Muscular Dystrophy (DMD) riski
bulunan bir erkek fötusun do¤um öncesi tan>-
s>. Önceki araflt>rmalar bu ailede komple bir
gen delesyonu göstermifltir.
4
49
9
fi
fieek
kiill 4
4--1
14
4..
X geçiflli müsküler distrofinin a¤>r Duchanne ve-
ya Becker formu alan hastalardan izole edilen protein ekst-
rakt>nda kas proteni alan distrofinin (okla iflaretli) bulunup
bulunmamas>n>n Western blot ile gösterilmesi ile aç>klama-
lar için 12. Bölüme bak>n>z (Orjinal fotogra Hospital for Sick
Children Toronta'dan P. Way'>n izniyle al>nm>flt>r.).
Distrofin
427kDa
NormalBecker 1
Becker 2
Dichenne