background image
rin klonlanmas>n> kolaylaflt>rmak amac>yla kulla-
n>labilir (Bkz., fiekil 4-1). DNA'daki bir genin özel
bir parças> (genellikle ekzonlar), bilinen özel pri-
merlerin kullan>lmas> ile normal gen dizisinden
h>zl> bir flekilde amplifiye edilebilir. Mutant gen,
daha sonra kolayl>kla sekanslanabilir (Bu daha
sonra tart>fl>lacakt>r.) veya ASO hibridizasyon me-
todu ile test edilebilir. Bir hastan>n DNA veya
RNA's>ndan bir genomik ya da cDNA kütüphane-
sinin oluflturulmas> ve ilgili genin izlenmesi flek-
linde çok zahmetli olan bir ifllem, flimdi bir günden
daha k>sa bir zaman içinde gerçekleflebilmektedir.
PCR, ayn> zamanda, reverstranskriptaz PCR
olarak bilinen bir ifllem ile küçük RNA örnekleri-
nin analizi için de uygulanabilir. mRNA'dan, cDNA kütüphanelerinin haz>rlanma-
s>nda kullan>lan ayn> revers transkriptaz enzi-
miyle, tek zincirli bir cDNA sentezlenir (Bkz., fie-
kil 4-5). Daha sonra ayn> DNA PCR'>nda oldu¤u
gibi PCR primerleri ve DNA polimeraz ilave edilir.
Oligonükleotidlerden biri, cDNA'n>n ikinci zin-
cirinin sentezini yapar; bu cDNA daha sonra, çift
iplikli formuyla PCR amplifikasyonu için bir hedef
olarak görev yapacakt>r. PCR çok duyarl> bir tek-
niktir. PCR bir hastadaki özgül gen dizilerini
klonlamadan ve de Southern veya Northern blot'a
gerek duyulmadan saptama ve analiz etme imka-
n> sa¤lar. Analizler, bir saç kökünden sa¤lanan
tek bir hücrede, a¤>z çalkant>s>nda bulunan bir
kaç yanak mukozas> hücresinde, dört hücre döne-
mindeki bir embriyodan al>nan tek bir blastomer-
de, tecavüze u¤ram>fl kurbanlar>n vajinal sürün-
tüsünden sa¤lanan tek bir spermde veya suç ma-
halindeki kurumufl bir kan damlas>ndan sa¤lanan
tek bir hücrede bile yap>labilir. Böylece, doku ör-
4
45
5
fi
fie
ek
kiill 4
4 ­
­ 1
10
0..
Polimeraz zincir reaksi-
yonu. nda bu-
lunan bir DNA bölgesinin sentezinin
tekrarlanarak, bu DNA bölgesinin
spesifik ve seçici olarak ço¤almas>.
Amplifikasyonun pepefle gelen üç
döngüsü, bir hedef dizinin sekiz kop-
yas>n>n tamam>n>n sonucunu göster-
mektedir. Amplifikasyonun 30 dön-
güsünden sonra, dizinin bir milyon-
dan fazla kopyas> oluflturulur.