background image
edilebilir kaynaktan ilk izole edilendir. Çekirde¤i
olmayan k>rm>z> kan hücreleri haricinde vucuttaki
herhangi bir hücre DNA kayna¤> olarak kullan>la-
bilir. Hasta DNA örneklerinin analizi için rutin
kan al>m> ile elde edilen lenfositlerden, genomik
DNA haz>rlanabilir. 10 ml periferal kan örne¤i,
yaklafl>k olarak 10
8
beyaz kan hücresi içerir ve bu
düzinelerce restriksiyon enzim kesimi için yeterli
miktarda 100 ug'dan daha fazla DNA sa¤lamakta-
d>r. Bununla beraber, genomik DNA, di¤er doku
örneklerinden de haz>rlanabilir; kültüre edilen de-
ri fibroblaslar>, do¤um öncesi tan> için amniyotik
s>v> veya koriyonik villus hücreleri (Bkz, Bölüm
18) veya herhangi bir organ biyopsisi (örne¤in; ka-
raci¤er, böbrek, plasenta). Bir genomik DNA örne-
¤inin restriksiyon enzimi ile kesilmesiyle oluflan
yaklafl>k bir milyon farkl> DNA fragmenti, agaroz
jel elektroforezi ile boyutlar>na göre ayr>l>r; bura-
da küçük olan fragmentler bir elektrik alan boyun-
ca büyük olanlardan daha h>zl> hareket eder. Bu
yolla ayr>flan, kesilmifl DNA fragmentleri, etidyum
bromür gibi bir floresan DNA boyas> ile boyand>-
¤>nda, genomik DNA fragmentleri bir floresan ma-
teryal yaymas> fleklinde görülür; çünkü, orada her-
biri birbirinden ayr>flm>fl çok fazla DNA fragmenti
bulunmaktad>r (fiekil 4-8,
soldaki). Southern blot
THOMPSON & THOMPSON TIBB< GENET
4
42
2
fi
fie
ek
kiill 4
4 ­
­ 7
7..
Genomik DNA gibi farkl> dizilerin kompleks ka-
r>fl>m>nda, spesifik DNA dizisinin analizi için Southern blot
ifllemi. Bu örnekte, 3. Örnek prob ile tan>mlanan DNA dizi-
si için farkl> bir restriksiyon enzim paternine sahip. Bu
farkl>l>k, restriksiyon fragmenti uzunluk polimorfizminden
dolay> (Bkz., Bölüm 6) veya tan>mlanan DNA dizisinin ya-
k>n>ndaki bir delesyondan dolay> olabilir.
X >fl>n>na
duyarl> film
Filtre