yonu için bir veya daha fazla restriksiyon bölgesi
içermelidir. Bir plazmidin
basamaklar>n flematik bir çizimi flekil 4-2'de göste-
rilmifltir.
kolonilerin seçilmesi, (Bunu çok miktarda ço¤alt-
ma ve saf plazmid DNA's>n>n izolasyonu takip e-
der.) klonlanan "insert" çok miktarda izolasyonu-
na olanak sa¤lamaktad>r. Plazmidlere klonlama,
k>sa DNA moleküllerinin analizi için gerekli olan
bir ifllemdir (Tablo 4-2).
celi olarak büyük (yaklafl>k 45 kb) çift iplikli DNA
molekülü bulunan bir bakteri virusu olan bakteri-
yofaj lambdad>r.
için replike olur, sonunda bu flekilde enfekte olmufl
bakteri hücresini öldürür ve bir milyon ya da ona
yak>n miktarda bakteriyofaj serbest kal>r. Büyü-
me ve liziz için bakteriyofaj genomunun yaklafl>k
üçte biri gerekli de¤ildir (fiekil 4-3'te internal seg-
mentler iflaret edilmifltir.) ve bunlar, di¤er DNA
dizileri ile yer de¤ifltirebilir Lambda faj>, insan
DNA s>n>n 20 kb kadar bir bölümünün klonlanma-
s> için oldukça uygundur.
s>ndaki zorluklardan biri, bakteri içine aktar>la-
cak olan rekombinant DNA'n>n 20 kb'dan büyük
olmas> durumunda sistemin kullan>fll> olmamas>-
d>r. Bu kullan>fls>z durumun üstesinden gelmek
için, kozmid vektörler gelifltirilmifltir. Kozmidler
esas olarak bakteriyofaj lambda enfeksiyöz parti-
külleri özelli¤ini kullanan, büyük lineer DNA par-
çac>klar>n> protein k>l>flar içine paketleyen ve bak-
terilerin yüzeyine yap>flarak DNA içeriklerini en-
jekte eden plazmidlerdir. Bu sistemin k>s>tlay>c>
yönü, bakteriyofaj kromozomu 50 kb boyutunu afl>-
yor ise, lambda kozmid içine DNA'y> paketleye-
mez. Lambda virüsüne benzer bir flekilde, bakteri
enfekte edilir, kozmid tekrar çembersel flekil al>r
ve büyük bir plazmid olarak replike olur. Yabanc>
DNA fragmentleri, lambda faj>n>n 2 kat> büyüklü-
¤ünde kozmid vektörlerde klonlanabilir.
fragmentleri bakteri içinde klonlanabilir hale gel-
mifltir. Bu tip büyük plazmidlere bakteri yapay
kromozomlar ad> verildi (BACs). BAC'lar, 100 ile
300 kb büyüklü¤ündeki insan DNA fragmentlerini
tafl>yabilir.
rildi¤i gibi plazmidlerle ayn>d>r. Plazmidlerin, koz-
3'-C CTAG^G-5'
C TTAA^G
CC^GG
T TCGA^A
CG CCGG^GG
GG^CG CC